超濾離心管的分子量選擇及使用前預(yù)處理方法介紹
點擊次數(shù):7686 更新時間:2021-04-13
超濾離心管常用于做細胞培養(yǎng)上清的蛋白濃縮的實驗,它會有一個類似于內(nèi)管和外管的兩個部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內(nèi)管中),這就是超濾的原理。
首先要為大家介紹的是超濾離心管的分子量選擇:
按照樣品量和目標分子量選擇適當?shù)碾x心超濾管,為了得到高收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的離心超濾管多次重復(fù)加樣離心。
如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到離心超濾管大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免接觸膜表面。
那么,在使用超濾離心管時需不需要進行預(yù)處理呢?
通常不需要預(yù)處理即可使用,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。對本產(chǎn)品表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本產(chǎn)品的相關(guān)知識。